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中農華正——莧黃正寶藥敏檢測的相關問題

發布時間：2018-06-26發布企業：北京中農華正獸藥有限責任公司人氣：7263

莧黃正寶藥敏檢測的相關問題

由于莧黃正寶口服液中含有大量陽離子活性成分，如各種黃連原小檗堿與麥康凱瓊脂和營養瓊脂的陰離子（硫酸脂多糖、海藻酸）發生正負電荷相吸，使得各種黃連原小檗堿（生物堿）失去自由擴散的能力，若使用紙片法于半固體瓊脂培養基時，無法形成比紙片大的抑菌圈，造成藥物敏感性假陰性（不敏感）實驗誤差。

建議使用液體培養基對莧黃正寶進行敏感性測試。肉湯稀釋法測定莧黃正寶大腸桿菌最小抑菌濃度。

一、培養基準備

水解酪蛋白肉湯（MHB）：稱取牛肉粉2.0g，酸水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，溶于1L蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，4℃保存備用。

二、實驗耗材

無菌試管，1ml無菌移液槍頭。

三、實驗步驟

1、培養基及莧黃正寶稀釋液：取13支無菌試管，其中三支分別標記肉湯對照，待測大腸桿菌生長對照，質控菌生長對照。剩余10支分別標記，1～10號。用MHB肉湯稀釋莧黃正寶至待測最高濃度（五百分之一）。像編號2～10號試管中分別加入2mlMH肉湯，然后轉向1號試管中加入4ml稀釋好的莧黃正寶，然后從中去除2ml加入到2號試管中混勻，取2ml加入到3號試管中，依次進行倍比稀釋至10號管后棄去2ml。質控菌按照同樣操作進行。

2、待測菌和質控標準菌準備：用MH肉湯稀釋菌液為107CFU/ml。

3、菌液接種：從低濃度莧黃正寶試管向高濃度莧黃正寶試管依次加入0.1ml菌液，使菌液終濃度為5×105CFU/ml。加樣時盡量避免移液槍頭與試管壁接觸。

4、結果判斷：37℃培養18—24h后，完全抑制待測菌有肉眼可見生長的最低莧黃濃度即為莧黃對待測菌的MIC。

質控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC29213；大腸桿菌ATCC25922；腸球菌ATCC29212；銅綠假單細胞ATCC27853。